Advertenties
Epitoopherstel
epitoopherstel (HIER), enzymatische voorbehandeling, of door een combinatie van beide. HIER is
de meest gebruikte methode van epitoopherstel voor IHC. Het mechanisme van HIER wordt nog
niet helemaal begrepen. Volgens de hypothese zorgt het verwarmen van de coupe in een
epitoophersteloplossing naar een hoge temperatuur voor hydrolisatie van de kruisverbindingen die
gevormd zijn in de formalinefixatie. Dit resulteert in het opnieuw wijzigen van het epitoop die
vervolgens kan worden gekleurd door immunohistochemie. De belangrijke factoren in HIER zijn
temperatuur, tijd en pH van de hersteloplossing. Er zijn twee verschillende
epitoophersteloplossingen voor gebruik in het BOND-systeem: een op citraat gebaseerde buffer en
een op EDTA gebaseerde buffer.
Enzymatische voorbehandeling maakt gebruik van proteolytische enzymen om peptideverbanden af
te breken om de epitoop/doel nucleïnezuursequentie te tonen. De enzymconcentratie en
incubatietijd zijn proportioneel met de fixatietijd van het patiëntmateriaal, en moet
dienovereenkomstig worden geoptimaliseerd. Enzymatische voorbehandeling is alleen geschikt voor
bepaalde epitopen, maar het wordt regelmatig gebruikt in ISH-protocollen.
14.3
Kwaliteitscontrole
Door verschillen in de verwerking van weefsel en technische procedures in het laboratorium van de
gebruiker kunnen de resultaten aanzienlijk verschillen, daarom zijn er, in aanvulling op de volgende
procedures, regelmatige in-house controles nodig van prestaties. Raadpleeg lokale richtlijnen en
regelgeving, en wellicht vindt u ook het „CLIA Compliance Handbook: The Essential Guide for the
Clinical Laboratory Second Edition"
Controles moeten verse autopsie/biopsie/chirurgische specimen zijn die zo snel mogelijk gefixeerd,
verwerkt en ingebed zijn op dezelfde manier als het patiëntmateriaal. Een dergelijke controle
monitort alle stappen van de analyse, van weefselvoorbereiding tot kleuring.
Wij raden sterk aan om geschikt controleweefsel op dezelfde glaasjes te leggen als patiëntweefsel.
Zie
6.2 Werken met controles
Zie:
14.3.1 Testverificatie
14.3.2 Weefselcontroles
14.3.3 Negatieve reagenscontrole voor IHC
14.3.4 Reagenscontroles voor ISH
14.3.5 De voordelen van kwaliteitscontrole
14.3.1
Testverificatie
Controleer voor het eerste gebruik van een antilichaam, probe of kleuringssysteem in een
diagnostische procedure de specificiteit van het antilichaam/de probe door het te testen op een
serie in-house weefsels met bekende expressie die staan voor bekend positief en negatief weefsel.
Ga naar de procedures die hierboven staan uitgewerkt en naar de aanbevelingen voor
kwaliteitscontrole van het CAP certificeringsprogramma 14 voor immunohistochemie en/of de IHC-
richtlijnen van het NCCLS
BOND 6.0 gebruikshandleiding (NIET VS en China) rev. A05 © Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd 2021
kan worden bereikt ofwel door gebruik te maken van warmte-geïnduceerd
7,8
en de door NCCLS voorgestelde richtlijnen voor IHC
22
voor meer toelichting.
of uw lokale regelgeving en richtlijnen.
14
BOND reagentia gebruiken
nuttig.
14
297
Advertenties
