Advertenties
7.1.2.1
Protocollen en protocolreeksen voor sequentiële dubbelkleuring
Sequentiële dubbelkleuren doorlopen hoofdzakelijk twee enkele-kleurreeksen na elkaar. Dat kunnen
twee IHC-reeksen zijn, twee ISH-reeksen, of een van elke, in elke volgorde. Meestal, maar niet
altijd, gebruikt de eerste merker het BOND Polymer Refine Detection systeem, met DAB
chromogeen en de tweede merker gebruikt het BOND Polymer Refine Red Detection systeem, met
Fast Red chromogeen.
Vaak kunnen sommige protocollen in de reeks waarin de tweede merker wordt aangebracht,
worden overgeslagen, of indien opgenomen, moeten ze gewijzigd worden. Stappen in de
kleuringsprotocollen voor de eerste en de tweede merkers moeten normaal gesproken ook worden
aangepast (de protocollen moeten beslist aangepast worden om de geschikte kleuringsmethode
ingesteld te hebben - zie
gegeven voor wijzigingen aan protocol en protocolreeks voor sequentiële dubbelkleuring. In alle
gevallen moet u uw eigen testen uitvoeren om resultaten te controleren.
Voorbereidingsprotocollen kunnen alleen gedraaid worden in de volgorde van de eerste merker
- BOND staat niet toe om een voorbereidingsprotocol te selecteren voor de tweede merker.
Vaak is epitoopherwinning maar een keer nodig, voor aanbrengen van de eerste merker. als er
nog meer epitoopherwinning nodig is voor de tweede merker, is een kortere duur beter.
Hybridisatie moet worden toegepast voor beide merkers in ISH dubbelkleuring, maar een
kortere duur dan wat gebruikt zou worden voor een enkele kleur kan geschikter zijn voor de
tweede merker.
Bij dubbele kleuring met twee DNA-probes is denaturatie vaak eenmaal nodig, voor het
aanbrengen van de eerste merker. Als extra denaturatie nodig is voor de tweede merker, heeft
dat normaal minder tijd nodig.
Voor kleuringsprotocollen worden over het algemeen de beste resultaten behaald als het
hematoxylinesegment wordt verwijderd uit het laatste deel van het eerste protocol en het
peroxideblokkeringssegment (indien aanwezig) wordt verwijderd uit het begin van het tweede
protocol.
BOND 6.0 gebruikshandleiding (NIET VS en China) rev. A05 © Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd 2021
7.1.1
Kleuringsmethodes). Hieronder worden een paar suggesties
Protocollen (op de BOND-controller)
153
Advertenties
