Advertenties
14.2.2
Voorbereiding weefsel
Wij adviseren 15 tot 20 keer het volume aan weefsel aan 10% neutraal gebufferde formaline om
weefsel te fixeren voor immunohistochemische en in-situ hybridisatie kleuring met behulp van het
BOND-systeem. Fixatie kan worden uitgevoerd op kamertemperatuur (15–25 °C).
Voor HER2-testen leest u de aanbevelingen voor weefselvoorbereiding van de American Society of
Clinical Oncology/College of American Pathologists
regelgeving.
Om het snijden van weefsel te vergemakkelijken en te voorkomen dat de messen van de microtoom
beschadigd raken, moet u benig weefsel voor de verwerking eerst ontkalken
De US Clinical Laboratory Improvement Act (CLIA) van 1988 bepaalt in 42 CFR 493.1259(b) dat
„Het laboratorium gekleurde glaasjes ten minste tien jaar moet bewaren vanaf de datum van
onderzoek, en patiëntmateriaalblokken ten minste twee jaar na de datum van onderzoek".
Raadpleeg lokale regelgeving voor de eisen voor uw instituut.
Snijd en neem 3 - 5 µm dikke coupes op positief geladen glaasjes (sommige specifieke
weefseltypes vereisen verschillende coupediktes). Om weefsel te drogen, legt u de goed uitgelekte
glaasjes 10-30 minuten in een oven op 60°C (±5°C), of een nacht lang op 37°C. Glaasjes kunnen
ook worden gebakken in de modules van BOND-III en BOND-MAX. Glaasjes moeten goed aan de
lucht worden gedroogd voordat u ze bakt. Raadpleeg referenties 13, 14 en 15 voor meer details
over de voorbereiding van patiëntmateriaal.
Hang labels aan patiëntmateriaal en controleglaasjes zoals beschreven in
Deparaffineren, rehydrateren en epitoopherstel zijn volledig geautomatiseerd in het BOND-systeem.
14.2.3
Deparaffineren en bakken
In paraffine ingebedde weefselcoupes voor immunohistochemie moeten eerst worden vrijgemaakt
van paraffine en de coupe moet worden gerehydrateerd. De paraffine wordt verwijderd met behulp
van BOND Dewax Solution en de coupes worden gerehydrateerd. Het BOND-systeem bevat
deparaffinageprotocollen die dit proces automatisch uitvoeren.
Voorafgaand aan het deparaffineren kan BOND ook het weefsel bakken zodat hij beter hecht aan
het glaasje. De BOND Bak- en deparaffinageprotocollen automatiseren zowel de bak- als
deparaffinageprocessen.
Let op dat weefsel aan de lucht moet worden gedroogd om al het water te verwijderen voordat het
in de BOND-module wordt geplaatst voor bakken en deparaffineren.
14.2.4
Epitoopherstel
Formaline-fixatie van weefsel veroorzaakt kruisverbinding tussen de aldehyde en aminogroepen in
het weefsel, en de vorming van deze verbanden kan uitmonden in variabel verlies van antigeniciteit
door het maskeringseffect. Formaline vormt methyleenbruggen die de algehele driedimensionale
vorm van het epitoop kunnen veranderen. Sommige epitopen zijn formalinegevoelig en tonen
verminderde immunoreactiviteit na formalinefixatie, terwijl anderen formalineresistent zijn.
Nucleïnezuren worden omgeven door proteïnen, daarom is permeabilisatie van weefsel nodig om
de doelsequenties open te stellen voor de probe.
BOND 6.0 gebruikshandleiding (NIET VS en China) rev. A05 © Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd 2021
, of raadpleegt u uw lokale richtlijnen en
10
BOND reagentia gebruiken
11,12.
13
4 Snelle
start.
296
Advertenties
