Advertenties
14.3.3 Negatieve reagenscontrole voor IHC
Gebruik negatieve reagenscontrole voor IHC in plaats van het primaire antilichaam bij een coupe van elk
patiëntmateriaal om niet-specifieke kleuring te beoordelen en om een betere interpretatie van specifieke kleuring
mogelijk te maken.
Aanbevolen ideale controlereagens:
l
Voor monoklonale antilichamen gebruikt u een antilichaam van hetzelfde isotype dat wordt
a
geproduceerd uit weefselcultuur supernatant, en op dezelfde manier als het primaire antilichaam, maar
dat geen specifieke reactiviteit toont met menselijke weefsels.
Verdun dit tot dezelfde immunoglobuline of proteïne concentratie als het primaire antilichaam dat
hetzelfde verdunningsmiddel gebruikt (BOND Primaire antilichaamsverdunningsmiddel).
Als foetaal kalfsserum behouden blijft in het schone antilichaam na verwerking, is foetaal kalfsserum in
een proteïneconcentratie, equivalent aan het verdunde primaire antilichaam in hetzelfde
verdunningsmiddel, ook geschikt voor gebruik.
b
Voor polyklonale antilichamen gebruikt u een immunoglobulinefractie (of heel serum, indien gepast)
van normaal of non-immuun serum van dezelfde dierlijke bron en dezelfde proteïneconcentratie als het
primaire antilichaam, met identiek verdunningsmiddel (BOND Primair antilichaamsverdunningsmiddel).
BOND primair antilichaamsverdunningsmiddel kan op zichzelf gebruikt worden als een minder aantrekkelijk
l
alternatief voor de eerder beschreven negatieve reagenscontroles.
De incubatieperiode voor de negatieve reagenscontrole moet overeenkomen met dat van het primaire
l
antilichaam.
Gebruik een apart negatieve reagenscontroleglaasje voor elke herstelmethode die u gebruikt (inclusief geen
l
herstel) voor een gegeven primair antilichaam.
Wanneer panels van verscheiden antilichamen worden gebruikt op seriële coupes, kunnen de negatieve
l
kleuringsgedeeltes van een glaasje dienen als negatieve/niet-specifieke bindende achtergrondcontroles voor
andere antilichamen.
Om endogene enzymactiviteit of niet-specifieke verbinding van enzymen te onderscheiden van specifieke
l
immunoreactiviteit, kleurt u extra patiëntweefsels respectievelijk met uitsluitend substraat-chromogeen of
enzymcomplexen en substraat-chromogeen.
Het BOND-systeem bevat een standaard negatieve IHC controlereagens, genaamd „*Negatief", dat kan worden
l
geselecteerd als de marker voor een IHC-protocol. Het dispenseert BOND Wash (zie
glaasjesinstellingen).
BOND 7 handleiding, 49.7556.508 A06
Copyright © 2023 Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd
14 BOND-reagentia gebruiken
10.5.2 Casus- en
337
Advertenties
