Advertenties
Volgorde
Protocol (of probe)
8
Kleuring
De geselecteerde protocollen voor protocolreeksen kunnen vooraf gedefinieerd zijn of u kunt aangepaste protocollen
aanmaken en deze selecteren (zie
7.1.2.1
Protocollen en protocolreeksen voor sequentiële multiplex kleuring
Sequentiële multiplex kleuringen voeren in wezen twee kleuringsprotocolsequenties na elkaar uit. Dat kunnen twee
IHC-reeksen zijn, twee ISH-reeksen, of een van elke, in elke volgorde. Meestal, maar niet altijd, gebruikt de eerste
merker het BOND Polymer Refine Detection systeem, met DAB chromogeen en de tweede merker gebruikt het BOND
Polymer Refine Red Detection systeem, met Fast Red chromogeen.
Vaak kunnen sommige protocollen in de reeks waarin de tweede marker wordt aangebracht, worden overgeslagen, of
indien opgenomen, moeten ze gewijzigd worden. Stappen in de kleuringsprotocollen voor de eerste en de tweede
markers moeten normaal gesproken ook worden aangepast (de protocollen moeten beslist aangepast worden om de
geschikte kleuringsmethode ingesteld te hebben - zie 7.1.1 Kleuringsmethodes). Hieronder worden een paar
suggesties gegeven voor wijzigingen aan protocol en protocolreeks voor sequentiële multiplexkleuring. In alle
gevallen moet u uw eigen testen uitvoeren om resultaten te controleren.
Voorbereidingsprotocollen (bijv. Deparafffineren) kunnen alleen gedraaid worden in de volgorde van de eerste
l
merker - de software staat niet toe om een voorbereidingsprotocol te selecteren voor de tweede
kleuringsprotocolsequentie.
Epitoopherstel kan slechts eenmaal nodig zijn voordat de eerste merker wordt aangebracht. Als extra herstel
l
nodig is voor de tweede merker, kan een kortere duur of lagere temperatuur voldoende zijn.
Als multiplex kleuring met twee probes wordt uitgevoerd, is denaturatie vaak slechts eenmaal nodig, voordat
l
de eerste merker wordt aangebracht. Als extra denaturatie nodig is voor de tweede merker, heeft dat normaal
minder tijd nodig.
Voor kleuringsprotocollen worden over het algemeen betere resultaten bereikt als het tegenkleuringssegment
l
(bijv. hematoxyline) aan het einde van het eerste protocol wordt verwijderd. Het wordt bewaard voor het
tweede protocol.
BOND 7 handleiding, 49.7556.508 A06
Copyright © 2023 Leica Biosystems Melbourne Pty Ltd
IHC of
ISH
Beide
Hoofdstuk 7.3: Nieuwe protocollen
7 Protocollen (op de BOND-controller)
Opmerking
Benodigd protocol voor aanbrengen van
chromogeen en bijbehorende reagentia. IHC-
grondkleuren worden afgegeven in dit protocol.
aanmaken).
170
Advertenties
