Inhoudsopgave
Advertenties
Opmerking: de stabiliteit van eluaat is sterk afhankelijk van verschillende factoren, en houdt
verband met de specifieke latere toepassing. Deze is voor de QIAamp DSP Virus Spin Kit
vastgesteld in combinatie met typische latere toepassingen. Het is de verantwoordelijkheid
van de gebruiker om de gebruiksaanwijzing voor de specifieke latere toepassing die in het
laboratorium wordt gebruikt te raadplegen en/of de gehele workflow te valideren om de juiste
opslagomstandigheden te bepalen.
Opbrengst en kwaliteit van virale nucleïnezuren
Meestal kan uit biologische monsters minder dan 1 µg virale nucleïnezuren worden geïsoleerd.
Voor het bepalen van de opbrengst wordt geadviseerd om gebruik te maken van kwantitatieve
amplificatiemethoden. Bij het kwantificeren van nucleïnezuren die zijn geïsoleerd met behulp
van het QIAamp DSP Virus Spin-protocol, moet u er rekening mee houden dat het monster
aanzienlijk meer drager-RNA dan viraal RNA bevat.
Drager-RNA dient twee doeleinden: in de eerste plaats verbetert het de binding van virale
nucleïnezuren aan het QIAamp-membraan, vooral als het monster zeer weinig doelmoleculen
bevat; in de tweede plaats verlaagt het toevoegen van grote hoeveelheden drager-RNA de
kans op afbraak van viraal RNA, in het zeldzame geval dat RNase-moleculen ontsnappen
aan denaturatie door de chaotropische zouten en reinigingsmiddel in lysisbuffer (AL). Als er
geen drager-RNA wordt toegevoegd aan lysisbuffer (AL), kan dit leiden tot verminderde
winning van viraal RNA of DNA.
Drager-RNA kan ook worden toegevoegd aan sommige reagentia voor interne controle of in
de handel verkrijgbare vervolgassays. Raadpleeg in dergelijke gevallen de bijbehorende
gebruiksaanwijzing van de fabrikant of vervolgassay.
De effectiviteit van amplificatiesystemen is afhankelijk van de totale hoeveelheid nucleïnezuur
die aanwezig is in de reactie. Eluaten uit deze kit bevatten zowel virale nucleïnezuren als
drager-RNA. De hoeveelheid drager-RNA is echter veel hoger dan de hoeveelheid virale
nucleïnezuren. De hoeveelheid eluaat dat moet worden toegevoegd aan vervolgamplificaties
Gebruiksaanwijzing (Handleiding) QIAamp DSP Virus Spin Kit 06/2022
7
Advertenties
Inhoudsopgave
