Inhoudsopgave
Advertenties
7 Probleemoplossing
7.2 Probleemoplossing elektrotransfer
Probleem
Diffuse bandpatronen
Probleem
Diffuse bandpatronen
Inefficiënte binding met membraan
Probleem
Chemische parameters
56
Oplossing
Verhoog voor natieve gels de nettolading op het
eiwit door over te schakelen naar een transfer-
buffer met een andere pH. Een lagere pH (<6-7)
verhoogt de positieve lading op eiwitten; een
hogere pH (>6-7) verhoogt de negatieve lading
op eiwitten.
Oplossing
Transfer onmiddellijk na elektroforetische schei-
ding. Verkort of elimineer de equilibratietijd of
verplaats de gel naar een koele ruimte tijdens
het equilibreren bij equilibratie voorafgaand aan
de transfer.
Indien de transferbuffer methanol (≥ 10%) bevat,
moet u de gel in de transferbuffer gedurende 30
minuten equilibreren om de gel te laten krimpen
voordat u de transferzuil assembleert.
Opmerking:
Omdat methanol ervoor zorgt dat de gel lichtjes
krimpt, zullen grote moleculen mogelijk lang-
zamer migreren.
Zorg ervoor dat de gel stevig tegen het
membraan zit en dat de gel niet meer verschuift
nadat er contact is gemaakt.
Controleer of het gewenste bindingsoppervlak
van het membraan (indien van toepassing) in
contact staat met de gel.
Oplossing
Fixeer of kruiskoppel het molecuul op het
membraan volgens de vereisten van het nucleï-
nezuur, het eiwit of het membraantype.
Bereid de eiwittransferbuffer voor zonder SDS.
miniVE Gebruiksaanwijzing 29281778 AB
Advertenties
Hoofdstukken
Inhoudsopgave
Probleemoplossen
