Inhoudsopgave
Advertenties
7.2
Probleemoplossing elektrotransfer
Onvolledige transfer
Probleem
Lege gebieden op het
membraan
Moleculen migreren niet uit de
gel
miniVE Gebruiksaanwijzing 29281778 AB
7.2 Probleemoplossing elektrotransfer
Oplossing
Verwijder alle ingesloten luchtzakken in de
transferzuil:
Assembleer de transferzuil terwijl deze is onder-
gedompeld in transferbuffer, druk voorzichtig op
elke spons als deze aan de transferzuil wordt
toegevoegd en rol een glazen pipet of testbuisje
over het membraan en de gel om alle luchtbellen
te verwijderen.
Gebruik buffer met een lagere ionensterkte.
Controleer de continuïteit van de elektrode.
Tijdens de transfer wordt een continue stroom
van gas afgegeven over de gehele lengte van de
elektroden. Als er geen belletjes worden
gevormd over de gehele lengte van de elektrode,
dient u de elektrode te vervangen.
Verhoog de veldsterkte.
Verhoog de transfertijd. Probeer deze te verdub-
belen.
Gebruik geen kleuring of fixeermiddelen op de
gel vóór de transfer.
Gebruik een dunnere gel.
Verlaag de acrylamideconcentratie van de gel.
Controleer of de pH van de buffer dicht bij de
beoogde pH ligt. De meeste buffers mogen niet
worden getitreerd; maak verse buffer.
Gebruik voor eiwitten 3,5 mm SDS (0.1%) in de
transferbuffer.
Vermijd het gebruik van methanol in de transfer-
buffer of beperk de hoeveelheid tot een absoluut
minimum.
Verleng de depurinatietijd van Southern blots.
7 Probleemoplossing
55
Advertenties
Hoofdstukken
Inhoudsopgave
Probleemoplossen
