Inhoudsopgave
Advertenties
3.B. Monstervoorbereiding van humane 'buffy coat'-monsters
Tabel 2. 'Buffy coat'-monstervolume en voorverwerkingsvereisten
Monstertype
Humaan
Blood DNA
'buffy coat'
Purification
System
(cat. nr. AS1015)
Verwerkingscapaciteit en opbrengst 'buffy coat'-monsters
Centrifugeren van een volbloedmonster bij 2.000 × g gedurende 20 minuten resulteert in
scheiding van het materiaal in drie lagen: een onderste laag met voornamelijk rode
bloedcellen, een bovenste laag met plasma en een dunne, witte laag op de scheiding die is
verrijkt met witte bloedcellen. Er kan een 1 ml-pipet worden gebruikt voor het zorgvuldig
afnemen van de verrijkte witte cellen ('buffy coat') uit de scheidingslaag. Normaal
gesproken resulteert dit in een tienvoudige concentratie van de witte cellen in een
bloedmonster, afhankelijk van de gebruikte techniek en de mate waarin de witte cellen
samenpakken. Karakteristieken zoals de leeftijd van het monster en wijze van bewaren,
helderheid van de plasmalaag en aantal witte bloedcellen kunnen de verkrijging van de
'buffy coat'-laag en de daaruit volgende DNA-opbrengst nadelig beïnvloeden.
®
Met de Maxwell
16 Blood DNA Cartridge en de 'buffy coat'-methode kan een volume van
250 µl 'buffy coat' (verkregen uit 2,5 ml volbloed) worden verkregen.
Opmerkingen:
1.
Het elutievolume is belangrijk.
Plaats 300 µl elutiebuffer in het Maxwell
!
250 µl 'buffy coat'-monster. Er zal wat elutiebuffer verloren gaan tijdens de cyclus
als gevolg van verdamping en bevochtiging van de MagneSil
elutie.
2.
Als men werkt met geconcentreerde gDNA-monsters, kunnen eventuele resterende
MagneSil
®
-deeltjes worden verwijderd met behulp van het magnetische elutierek of
door centrifugeren van het geëlueerde materiaal, gevolgd door overbrenging van het
supernatant naar een nieuwe buis.
3.
De concentratie van het gezuiverde DNA moet worden bepaald door absorptie bij
A
. De DNA-zuiverheid moet worden bevestigd door agarosegelelektroforese en
260
door het bepalen van de A
4.
Voor verdere diagnostische toepassingen waarbij gebruik wordt gemaakt van
DNA gezuiverd met behulp van het Maxwell
controles worden uitgevoerd.
5.
Tijdens de prestatie-evaluatie werd overdracht van DNA tussen cartridges aangetoond
als < 6 pg/µl. De gebruiker is verantwoordelijk voor het vaststellen van de prestatie-
eigenschappen die noodzakelijk zijn voor verdere diagnostische toepassingen.
Promega Corporation · 2800 Woods Hollow Road · Madison, WI 53711-5399 VS
Bel gratis in VS 800-356-9526 · Tel. 608-274-4330 · Fax 608-277-2516 · www.promega.com
Gedrukt in de VS.
4/13
Kit
Volume
250 µl
geconcentreerd
uit 2,5 ml
volbloed
®
/A
verhouding, die normaal gesproken >1,7 is.
260
280
Voorverwerkingsvereisten
1. Centrifugeer Vacutainer
gedurende 20 minuten
bij 2.000 × g.
2. Neem de witte cellen weg met
behulp van een 1 ml-pipet.
3. Voeg het monster toe aan kamer
nr. 1 .
16 elution tube tijdens de verwerking van
®
-deeltjes tijdens de
®
16 System, moeten geschikte
®
buis
Onderdeelnr. TM301
Pagina 7
Advertenties
Inhoudsopgave
