Inhoudsopgave
Advertenties
Hoe dient u recoveries te kwantificeren
Bereken de totale recovery, het percentage concentraat recovery en het percentage filtraat recovery
met behulp van onderstaande methode. Deze procedure biedt een goede benadering van recoveries voor
oplossingen met concentraties tot maximaal ongeveer 20 mg/ml.
NB: Geschikte analysetechnieken zijn onder andere absorptie spectrofotometrie, radioimmunoassay,
refractieve index en conductiviteit.
Weegprocedure
De dichtheid van de meeste verdunde eiwitten is bijna gelijk aan de dichtheid van water (d.w.z. 1 g/ml). Met
deze eigenschap kunnen de concentraat- en filtraatvolumes worden gekwantificeerd door ze te wegen en de
eenheden van gram naar millimeter te converteren. Deze techniek is alleen geldig voor oplossingen met een
concentratie van ongeveer 20 mg/ml of minder.
1.
Weeg voor gebruik de monstercontainer en een lege testbuis (15 ml inhoud).
2.
Vul de monstercontainer met oplossing en weeg opnieuw.
3.
Zet de centrifuge filter in elkaar en centrifugeer volgens de instructies. Giet het filtraat af in een
vooraf gewogen testbuis. Als verdere concentratie gewenst is, draait u een tweede keer, giet vervol-
gens het concentraat in de testbuis met het eerste filtraat. Weeg de testbuis met het filtraat (of de
filtraten) opnieuw.
4.
Demonteer de filter en weeg de monstercontainer plus het concentraat opnieuw.
5.
Trek het gewicht van de lege testbuis of de monstercontainer er af om het gewicht te berekenen van
het startmateriaal, filtraat en concentraat.
6.
Analyseer het startmateriaal, filtraat en concentraat om de concentratie van de opgeloste stof vast
te stellen.
7.
Bereken de recovery met behulp van gewicht/volumegegevens en de gemeten concentraties als volgt:
% concentraat = 100 ×
% filtraat recovery= 100 ×
% totale recovery = % concentraat + % filtraat recovery
W
= totaal gewicht van concentraat voor analyse
c
W
= gewicht van oorspronkelijk startmateriaal
o
W
= gewicht van filtraat
f
C
= concentraatconcentratie
c
C
= oorspronkelijke startmateriaalconcentratie
o
C
= filtraatconcentratie
f
10
W
× C
c
c
W
× C
o
o
W
× C
f
f
W
× C
o
o
Centriprep® 10K en 30K Centrifuge filters units
Advertenties
Inhoudsopgave
